Pemeriksaan E Coli (Metode H2S)

Alat :

·         Kompor

·         Tabung reaksi dg tutup ulir / botol bertutup tahan panas

·         Sterilisator (autoclave, drying oven)

·         Lampu spiritus

·         Timbangan

·         Pipet (1 ml , 10 ml )

·         Gelas ukur, erlenmeyer

·         Rak tabung

·         Botol media

Bahan :

·         Sodium thiosulfate (NA₂S₂SO₄)

·         Kertas saring

·         Pepton (bakteriological peptone)

·         Dipotasium hydrogen phosphate (K₂HPO₄ )

·         Ferric ammonium citrate (FAC)

·         Teepol

·         Aquadest/aquabi dest

·         Lain-lain (pH lakmus, spidol, label)

Cara Kerja :

a.       Prosedur pembuatan Media

• Pepton : 40,0 GR ; K₂HPO_{4 :} 3,0 GR ; FAC : 1,5 GR ; NA₂S₂SO₄ : 1,0 GR ; dan aquabidest 1.000 ml.
• Tambahkan Teepol 2,0 ml
• Dipanaskan sambil diaduk perlahan lahan sampai larutan homogen/merata, kemudian diamkan sampai dingin.
• Masukan kertas saring berlipat (8 x 8 cm) kedlm tabung/botol media, kemudian pipet larutan media 1 ml untuk sampel 20 ml, & 2,5 ml untuk sampel 100 ml.
• Tabung-tabung tersebut disteril pada suhu 121 ^oc selama 15’ kemudian dikeringkan (oven 60 ^oc selama 30’).
• Dinginkan, simpan media pada suhu 4 – 8 ^oC.

b.      Prosedur pemeriksaan

·         Ambil 1 tabung media.

·         Masukan sampel air 20 cc atau sampai tanda batas kedalam tabung/botol media (lewat mulut tabung diatas nyala api ,agar tetap steril).

·         Simpan di rak tabung pada suhu ruangan selama 1 – 3 hari.

c.       Prosedur pembacaan hasil

     Cara kualitatif :  

·         Negatif  à jika tidak terjadi perubahan warna pada media

·         positif  E Coli à jika terjadi perubahan warna pada media menjadi hitam / ke-hitaman.

     Cara Semi kualitatif :  

Botol 100 ml :

·         Warna hitam dalam waktu 1 – 3 hari berarti mengandung 1 bakteri/100 ml.

·         Warna hitam pekat dalam waktu < 24 jam, mengandung  banyak bakteri/100 ml.

Tabung 20 ml :

·         Warna hitam dalam waktu 1 – 3 hari berarti mengandung > 5 bakteri/100 ml.

·         Warna hitam pekat dalam waktu < 24 jam, mengandung  >50 bakteri/100 ml.